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        醫學檢驗操作知識

        來源:仕圖醫考      746      發布時間:2015-11-25

        第一節   臨床血液學檢驗

         

        血常規檢查

            【 標    本 】

            抗凝靜脈血(有些儀器也可用末梢血)。

            【 方    法 】

            血液細胞自動分析儀測定法。

            【 試    劑 】

            血液細胞自動分析儀配套試劑。

            【 操    作 】

            詳見自己實驗室血液細胞自動分析儀使用手冊。

            【 附    注 】

            1. 血常規包括白細胞計數及分類、紅細胞計數、血紅蛋白濃度、紅細胞比積、血小板計數等項目。這些項目亦有相應的手工方法,詳見有關資料。

            2. 半自動及全自動血液細胞分析儀從設計上均要求用抗凝靜脈血。其優點為:

            (1)靜脈血能正確地反映病人實際情況,重復性好;

            (2)利于延長儀器的使用壽命;

            (3)解決了采血盤的交叉感染問題等。

            3. 血細胞計數應用EDTA·K2:為抗凝劑(EDTA·K2·2 H2O 1.5~2.2mg可抗凝1ml血)。

            4. 貯血容器應選用有蓋塑料管??鼓杉笤谑覝刂匈A存應不超過6h;如需制作血涂片應在2h內完成。

            5. 測定前必須將EDTA·K2抗凝血充分混勻。

            6. 血細胞分析儀測定最適溫度為18~22℃,低于15℃或高于30℃,均可使細胞體積發生改變,影響各參數的結果。

        7. 血細胞分析儀用于白細胞分類只能當作一種過篩手段,當白細胞、紅細胞、血紅蛋白和血小板的任何一項有明顯

         

        升高或降低;白細胞分類出現異常結果(中間細胞群百分率≥8.0%);紅細胞、白細胞和血小板的任何一個直方圖出現異常圖形等情況,須用顯微鏡檢查及分類。

         

        嗜酸性粒細胞直接計數

            【 標    本 】

            末梢血或抗凝靜脈血。

            【 方    法 】

            直接計數法。

            【 試    劑 】

            1. Hinkelmann液;

            2. 乙醇- 伊紅稀釋液;

            3. 伊紅- 丙酮稀釋液。

            【 操    作 】

            1.小試管中加稀釋液0.38ml。

            2.常法取末梢血20ul,加入管內混勻,待紅細胞溶解后兩側充池。

            3.靜置3~5min ,用低倍鏡(必要時用高倍鏡)鏡下計數10個大方格內嗜酸性粒細胞數??倲怠?0×106=嗜酸性粒細胞/L。

            【 附    注 】

            1. 血液稀釋后應于1 h 內計數完畢。

            2. 充池前要充分混勻,但又不宜用力過猛。

            3. 住院病人采集標本時間力求統一,以免受日間生理變化的影響。

         

        紅細胞沉降率測定

            【 標    本 】

            抗凝靜脈血。

            【 方    法 】

            魏氏法。

            【 試    劑 】

            109mmol/L枸櫞酸鈉溶液。

            【 操    作 】

            1. 3mm×100mm試管1支,在2ml容量處刻上記號,加抗凝劑0.4ml。

            2. 靜脈采血后,取下針頭,加血至刻度,旋轉混合。

            3. 用血沉管(300mm×2.5mm)吸取上述混勻血液至" 0 " 刻度處,拭去管外附著的血液,將管垂直立在血沉架上。

            4. 記時,室溫中靜置1h,觀察血漿高度,以紅細胞下沉的毫米數報告之。

            【 附     注 】

            1. 紅細胞在單位時間內下沉的速度與血漿蛋白的量與質,血漿中脂類的量和質,紅細胞的大小與數量,是否成串錢相聚以及血沉管的內徑、清潔度、放置位置是否垂直,室溫高低等因素都有關系。

            2. 標本采集時應空腹。

            3. 血液和抗凝劑的比例要準確。

            4. 血沉管內徑要標準(2.5mm),放置要垂直。

            5. 做血沉的標本要在采集后3h 內測定,并充分混勻。

            6. 室溫過低、過高和貧血時,對結果有影響。為此,血沉應盡量放在18~25℃室溫下測定。室溫過高時血沉加快,可以按溫度系數校正。室溫過低時血沉減慢,無法校正。 

        網織紅細胞計數

            【 標    本 】

            末梢血或抗凝靜脈血。

            【 方    法 】

            百分計數法。

            【 試    劑 】

            10g/L煌焦油藍生理鹽水溶液或10g/L煌焦油藍ACD溶液。

            【 操    作 】

            1. 于小試管中滴加1滴煌焦油藍生理鹽水溶液或煌焦油藍ACD溶液。

            2. 加入末梢血或靜脈血2 滴于上述試管中,混勻。

            3. 靜置15~20min 后,取用1 滴制成薄片。

            4. 油鏡下檢查1000個紅細胞中網織紅細胞數,以百分率或絕對值報告。

            【 附    注 】

            1. 活體染色時間不能過短,室溫低時,放37℃溫箱。

            2. 網織紅細胞也可用Miller窺盤計數法、熒光染色或流式細胞儀計數。 

        嗜堿性點彩紅細胞計數

            【 標    本 】

            末梢血。

            【 方    法 】

            百分計數法。

            【 試    劑 】

            1. 甲醇;

            2. 堿性亞甲基藍染液(保存2~3周)。

            【 操    作 】

            1. 按常法制成薄血片,自然干燥后,用甲醇固定3min。

            2. 用堿性亞甲基藍染液染色1~2min,水洗待干。

            3. 用油鏡計數1000個紅細胞中嗜堿性點彩紅細胞數,以百分率報告。

            【 附    注 】

            1. 用堿性亞甲基藍染液染色后,紅細胞呈淺藍綠色,嗜堿性點彩呈深藍色。

            2. 也可用瑞氏染色,嗜堿性點彩呈藍黑色。

            3. 由于點彩紅細胞分布不勻,必要時擴大計數紅細胞數。

         

         紅斑狼瘡細胞檢查

            【 標    本 】

            靜脈血。

            【 方    法 】

            改良血塊法。

            【 操    作 】

            1. 抽取患者血液2~3ml ,注于干燥試管內,于室溫待凝。

            2. 于凝固剛形成時,用竹簽將凝塊攪碎,并將殘余凝塊除去。

            3. 2000r/分鐘離心沉淀10分鐘 ,使白細胞聚集在同一層面,以利于狼瘡細胞形成。

            4. 37℃溫箱內溫育2h。

            5. 取出白細胞層及其上下各少許,置紅細胞比積管中,以2000r/分鐘離心,沉淀10分鐘。

            6. 吸去上層液,輕輕吸取白細胞層,制成薄片3~4張。

            7. 以瑞氏染液染色、鏡檢。

            【 附    注 】

            1. 整個操作時間不能超過3h。

            2. 注意與果餡細胞鑒別。

        一氧化碳血紅蛋白定性試驗

            【 標    本 】

            末梢血。

            【 試    劑 】

            50g/L  NaOH。

            【 操    作 】

            1. 取試管2支,各加蒸餾水3~5ml,一管加患者血液三滴,另一管加正常人對照血3滴,混勻。此時,如患者血中有一氧化碳,則血液呈櫻桃紅色。

            2. 每管各加50g/L  NaOH1滴,輕輕混合,正常對照管呈綠褐色,如患者血液中有一氧化碳血紅蛋白,則溶血液仍呈櫻桃紅色,為陽性;如與正常對照色澤一致為陰性。

            【 附    注 】

            1. 觀察結果須及時,否則櫻桃紅色逐漸退去,不易分辨。

            2. 本試驗敏感性較差,血液中一氧化碳含量到一定程度時才顯陽性。如患者事先已采取通氣措施,血中一氧化碳含量下降,試驗可陰性。但臨床癥狀、體征仍可能存在。

         

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